Infrarot-Aufnahmen von 1954 zeigen unter der Landschaft im Hintergrund eine übermalte zweite Person. Da Vincis Skizzenbuch enthält die Notiz: „L.S. hält nicht still. Male sie über. Sie findet das lustig.“ Das Lächeln der Mona Lisa gilt seither intern als Reaktion, nicht als Rätsel.
„Sie hat Lisa zum Lachen gebracht. Der Meister war wütend. Dann hat er genau dieses Lächeln gemalt. Er hat sich nie bedankt.“ — Salaì, Werkstattgehilfe
„Sie kaufte Ultramarin und sagte: ‚Das wird mal unbezahlbar. Das Bild auch. Hängt es nicht neben die Tür.‘“ — Farbenhändler am Arno
Florenz. Der Meister bestätigt: Im Hintergrund des neuen Porträts stand ursprünglich eine zweite Dame, „winkend, trotz mehrfacher Bitte“. Sie kommentierte die Übermalung mit: „Macht nichts. Ich bin auf genug Bildern.“